三黍生物

服务介绍 项目列表 技术路线 样本要求 案例解析
  • 蛋白质互作网络是由单独a蛋白通过彼此之间的相互作用构成,来参与生物信号传递、基因表达调节、能量和物质代谢及细胞周期调控等生命过程的各个环节。系统分析大量蛋白在生物系统中的相互作用关系,对于了解生物系统中蛋白质的工作原理,了解疾病等特殊生理状态下生物信号和能量物质代谢的反应机制,以及了解蛋白之间的功能联系都有重要意义。
    蛋白质相互作用通常可以分为物理互作和遗传互作。物理互作是指蛋白质间通过空间构象或化学键彼此发生的结合或化学反应,是蛋白质互作的主要研究对象。而遗传互作则是指在特殊环境下,蛋白质或编码基因收到其他蛋白质或基因的影响,常常表现为表型变化之间的相互关系。蛋白质互作网络包括:蛋白质互作检测技术(免疫共沉淀技术、酵母双杂交技术、串联亲和纯化-质谱分析技术、蛋白质互作预测技术、遗传互作检测技术)蛋白质互作数据库、蛋白质互作网络。
    本公司凭借长期分子生物学工作的丰富经验,集中人力,为您提供高效、快捷的蛋白互作验证服务。已成熟开发的体系包括:酵母双杂技术、荧光双分子互补技术、荧光素酶技术、串联亲和纯化-质谱分析技术。
     
    1. 服务内容

    • 目的基因获得;
    • 载体构建;
    • 蛋白表达/瞬时表达;
    • 结果分析;
    • 返还结果;
     
    2. 服务说明

    • 客户可以提供构建好的载体,但需提交明确的待验证蛋白信息,包含核苷酸序列信息、氨基酸序列信息等;
    • 对于只提供序列或者目的基因的客户,公司可以提供载体构建服务,费用另计;
    • 由于生物实验的不确定性,对于自激活严重或结果为阴性的项目,公司将正常收取全部费用。
     
    3. 实验周期

    实验周期30-60天。
  • 酵母双杂验证
    酵母双杂交由Fields在1989年提出. 他的产生是基于对真核细胞转录因子特别是酵母转录因子GAL4性质的研究. GAL4包括两个彼此分离的但功能必需的结构域. 位于N端1-147位氨基酸残基区段的DNA结合域(DNA binding domain,DNA-BD)和位于C端768-881 位氨基酸残基区段的转录激活域(Activati酵母双杂交模型on domain,AD).DNA-BD能够识别位于GAL4效应基因(GAL4-responsivegene)的上游激活序列(Upstream activating sequence,UAS),并与之结合. 而AD则是通过与转录机构(transcriptionmachinery)中的其他成分之间的结合作用,以启动UAS下游的基因进行转录. DNA-BD和AD单独分别作用并不能激活转录反应,但是当二者在空间上充分接近时,则呈现完整的GAL4转录因子活性并可激活UAS下游启动子,使启动子下游基因得到转录。

     
    1. 技术原理

     
    2. 应用

    • 发现新的蛋白质和蛋白质的新功能
    • 在细胞体内研究抗原和抗体的相互作用
    • 筛选药物作用位点及药物对蛋白相互作用影响
    • 建立基因组蛋白连锁图
     
    3. 实验流程

    • 构建包含目的蛋白的质粒(需客户确认目的蛋白接在荧光蛋白的N端还是C端)
    • 重组目的质粒转化酵母进行自激活验证;
    • 双转酵母进行互作验证;
    • 拍照,分析结果。
     
    4. 服务说明

    • 客户可以提供构建好的载体,但需提交明确的待验证蛋白信息,包含核苷酸序列信息、氨基酸序列信息等;
    • 对于只提供序列或者目的基因的客户,公司可以提供载体构建服务,费用另计;
    • 由于生物实验的不确定性,对于自激活严重或结果为阴性的项目,公司将正常收取全部费用。
     
    5. 反馈客户信息

    • 完整的实验报告,包括详细的实验步骤及结果;
    • 原始图片,包含阴性对照、阳性对照、实验组;
    • 构建好的质粒及酵母菌;
     
    6. 结果示例

     
     
     
     
     
     
    双分子荧光互补(BiFC)验证
    双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)分析技术,是由Hu等在2002年最先报道的一种直观、快速地判断目标蛋白在活细胞中的定位和相互作用的新技术。该技术巧妙地将荧光蛋白分子的两个互补片段分别与目标蛋白融合表达,如果荧光蛋白活性恢复则表明两目标蛋白发生了相互作用·其后发展出的多色荧光互补技术(multicolor BiFC),不仅能同时检测到多种蛋白质复合体的形成,还能够对不同蛋白质间产生相互作用的强弱进行比较。目前,该技术已用于转录因子,不同蛋白质间产生相互作用强弱的比较以及蛋白质泛素化等方面的研究工作上。
     
    1. 技术原理



    2. 实验流程

    • 构建包含目的蛋白的质粒(需客户确认目的蛋白接在荧光蛋白的N端还是C端)
    • 重组目的质粒转化农杆菌;
    • 农杆菌菌液注射烟草叶片;
    • 共聚焦显微镜观察和拍照。
     
    3. 服务说明

    • 客户可以提供构建好的载体,但需提交明确的待验证蛋白信息,包含核苷酸序列信息、氨基酸序列信息等;
    • 对于只提供序列或者目的基因的客户,公司可以提供载体构建服务,费用另计;
    • 由于生物实验的不确定性,对于自激活严重或结果为阴性的项目,公司将正常收取全部费用。
     
    4. 反馈客户信息

    • 完整的实验报告,包括详细的实验步骤及结果;
    • 原始图片,包含YFP、 DIC、Merge;
    • 构建好的质粒及农杆菌;;
     
    5. 结果示例
     
     
     
    Luciferase (LUC)验证

    荧光素酶报告基因是指以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence)。该技术巧妙地将荧光素酶蛋白分子的两个互补片段分别与目标蛋白融合表达,如果荧光素酶蛋白活性恢复则表明两目标蛋白发生了相互作用。该技术操作简单,方便快捷。
     
    1. 技术原理

     
     
    2. 实验流程

    • 构建包含目的蛋白的质粒(需客户确认目的蛋白接在荧光素酶蛋白的N端还是C端)
    • 重组目的质粒转化农杆菌;
    • 农杆菌菌液共注射烟草叶片;
    • 化学荧光显色和拍照。
     
    3. 服务说明

    • 客户可以提供构建好的载体,但需提交明确的待验证蛋白信息,包含核苷酸序列信息、氨基酸序列信息等;
    • 对于只提供序列或者目的基因的客户,公司可以提供载体构建服务,费用另计;
    • 由于生物实验的不确定性,对于自激活严重或结果为阴性的项目,公司将正常收取全部费用。
     
    4. 反馈客户信息

    • 完整的实验报告,包括详细的实验步骤及结果;
    • 原始图片,包含Luc、 DIC、Merge;
    • 构建好的质粒及农杆菌;;
     
    5. 结果示例