三黍生物

服务介绍 项目列表 技术路线 样本要求 案例解析
  • 核酸与蛋白互作不仅是生物有机体展示其生命活动的基本形式之一,还是核酸和蛋白功能阐释的重要内容。其中,RNA/DNA pull down是研究体外条件下RNA或DNA与蛋白互作的重要技术。该技术通过体外转录目的RNA的一部分或全长,用生物素标记转录产物,再与链霉亲和素磁珠孵育使之固定在磁珠上,用以“pull down”互作蛋白,纯化的产物蛋白经特定抗体的western-blot实验,可验证某种蛋白与目的RNA/DNA是否有相互作用;纯化的蛋白经质谱鉴定,即可筛选到与目的RNA结合的蛋白。
    本公司凭借长期分子生物学工作的丰富经验,集中人力,为您提供高效、快捷的蛋白互作验证服务。已成熟开发的体系包括: pull down、ChIRP、ChIP、酵母单杂等。
     
    1. 服务内容

    • 目的基因获得;
    • 载体构建;
    • 蛋白表达/瞬时表达;
    • 结果分析;
    • 返还结果;
     
    2. 服务说明

    • 客户可以提供纯化好的蛋白,但蛋白纯度要高;
    • 对于只提供原样的客户,公司可以进行RNA体外转录等实验,费用另计;
    • 由于生物实验的不确定性,对于结果为阴性的项目,公司将正常收取全部费用。
     
    3. 实验周期


    • 实验周期30-60天。

    RNA/DNA  pull down

    RNA pull down是体外研究RNA/DNA与蛋白互作的重要技术。该技术通过体外转录靶RNA的一部分或全长,用生物素标记转录产物,再与蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素磁珠结合,从而把靶RNA结合蛋白从蛋白提取液中分离出来。复合物从磁珠上洗脱下来,通过western blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与靶RNA结合;通过质谱仪检测,可以筛选到与靶RNA结合的蛋白。
  • 1. 技术原理

    生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用;其中活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下,与已知的几乎所有生物大分子偶联。因此用生物素标记核酸后,利用生物素和链霉亲和素之间的亲和作用,可以纯化出各种生物大分子复合物。
    RNA pull down实验是用生物素标记体外转录的靶RNA分子,再用链霉亲和素纯化出与靶RNA结合的蛋白复合体,洗脱得到RNA结合蛋白质。
     
    2. 应用

    • 靶RNA结合蛋白的验证或筛选。
     
    3. 实验流程
     
    4. 服务说明

    • 客户可以提供纯化好的蛋白,但蛋白纯度要高;
    • 对于只提供原样的客户,公司可以进行RNA体外转录等实验,费用另计;
    • 由于生物实验的不确定性,对于结果为阴性的项目,公司将正常收取全部费用。
     
    5. 反馈客户信息

    • 完整的实验报告,包括详细的实验步骤及结果;
    • Western-Blot或者MS鉴定结果;
     
    ChIRP

    ChIRP是研究体内RNA与蛋白互作的有力工具。该技术在特定时间点用甲醛交联等方式固定细胞内RNA与蛋白及核酸的互作复合物,再利用生物素标记的探针及链霉亲和素磁珠纯化出靶RNA及其与它结合的蛋白、核酸复合物,复合物中的蛋白质被洗脱下来做western-blot,可以验证某个蛋白是否与靶RNA结合;洗脱下来的蛋白液做质谱鉴定,即可筛选出与目的RNA结合的蛋白。
     
    1. 技术原理

    生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用;其中活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下,与已知的几乎所有生物大分子偶联。
        ChIRP技术利用生物素标记探针识别靶RNA,在纯化靶RNA的同时将与它结合的蛋白也一并纯化出来,洗脱得到靶RNA的结合蛋白质。
     
    2. 实验流程

     

    3. 服务说明

    • 客户可以提供纯化好的蛋白,但蛋白纯度要高;
    • 对于只提供原样的客户,公司可以进行RNA体外转录等实验,费用另计;
    • 由于生物实验的不确定性,对于结果为阴性的项目,公司将正常收取全部费用。
     
    4. 反馈客户信息

    • 完整的实验报告,包括详细的实验步骤及结果;
    •  Western-Blot或者MS鉴定结果;