三黍生物

服务介绍 项目列表 技术路线 样本要求 案例解析
  • 启动子是基因的一个重要组成部分,控制基因表达(转录)的起始时间和表达的程度。启动子本身并不控制基因活动,而是通过与称为转录因子(transcription factor)的这种蛋白质(proteins)结合而控制基因活动的。转录因子就像一面“旗子”,指挥着酶(enzymes)(RNA聚合酶RNA polymerases) 的活动。围绕启动子的相关科研包括启动子响应元件分析、组织特异性表达分析、与转录因子互作分析、定点突变分析等。
     
    1. 服务内容

     
    • 载体构建;
    • 农杆菌转化/酵母转化;
    • 烟草侵染/酵母验证;
    • 激光共聚焦显微镜拍照/筛选;
    • 结果分析返还结果;
     
    2. 服务说明

    • 客户可以提供构建好的载体,需提供详细的载体参数信息;
    • 对于只提供原样(基因模板)的客户,公司可以进行载体构建,费用另计;
    • 由于生物实验的不确定性,对于结果为阴性的项目,公司将正常收取全部费用。
     
    3. 反馈客户信息

    • 含有目的片段的高纯度质粒和含有重组质粒的菌液;
    • 提供相应的实验记录、测序结果、酶切位点、电泳图及完整的实验报告;
    • 提供可用于发表文章的高清图片,包含阴性对照、阳性对照、实验组;
    • 提供完整结项报告。
     
    4. 实验周期

    • 实验周期30-45天。

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    酵母单杂
    酵母单杂交(Yeast one-hybrid)是根据DNA结合蛋白(即转录因子)与DNA顺式作用元件结合调控报道基因表达的原理,克隆与靶元件特异结合的转录因子基因(cDNA)的有效方法。其理论基础是:许多真核生物的转录激活子由物理和功能上独立的DNA结合区(DNA-binding domain BD)和转录激活区(Activation domain AD)组成,因此可构建各种基因与AD的融合表达载体,在酵母中表达为融合蛋白时,根据报道基因的表达情况,便能筛选出与靶元件有特异结合区域的蛋白。理论上,在单杂交检测中,任何靶元件都可被用于筛选一种与之有特异结合区域的蛋白。

     
    1. 技术原理


     
     
     
    2. 应用


    • 验证上游蛋白与下游基因是否结合
    • 验证未知基因的上下游关系
    • 研究启动子响应元件
     
    3. 实验流程


    • 构建包含目的基因的质粒;
    • 重组后带有启动子序列的目的质粒转化酵母进行自激活验证;
    • 双转酵母进行互作验证;
    • 拍照,分析结果。
     
    4. 服务说明


    • 客户可以提供构建好的载体,但需提交明确的待验证蛋白/启动子信息,包含核苷酸序列信息、氨基酸序列信息等;
    • 对于只提供序列或者目的基因的客户,公司可以提供载体构建服务,费用另计;
    • 由于生物实验的不确定性,对于自激活严重或结果为阴性的项目,公司将正常收取全部费用。
     
    5. 反馈客户信息

    • 完整的实验报告,包括详细的实验步骤及结果;
    • 原始图片,包含阴性对照、阳性对照、实验组;
    • 构建好的质粒及酵母菌;
     
    6. 结果示例

     
     

    Luciferase 验证
    光素酶报告基因是指以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence)。该技术巧妙地将荧光素酶基因作为报告基因,如果待验证蛋白能够激活待验证启动子区,则荧光素酶基因正常表达,编码蛋白后催化底物自发荧光。该技术操作简单,方便快捷,可以定量计算荧光强度。
     
    1. 技术原理
     
     
    2. 应用

    • 验证上游蛋白与下游基因是否结合
    • 验证未知基因的上下游关系
    • 研究启动子响应元件
     
    3. 实验流程

    • 构建包含目的基因的质粒;
    • 重组后带有启动子序列的目的质粒转化酵母进行自激活验证;
    • 双转酵母进行互作验证;
    • 拍照,分析结果。
     
    4. 服务说明

    • 客户可以提供构建好的载体,但需提交明确的待验证蛋白/启动子信息,包含核苷酸序列信息、氨基酸序列信息等;
    • 对于只提供序列或者目的基因的客户,公司可以提供载体构建服务,费用另计;
    • 由于生物实验的不确定性,对于自激活严重或结果为阴性的项目,公司将正常收取全部费用。
     
    5. 反馈客户信息

    • 完整的实验报告,包括详细的实验步骤及结果;
    • 原始图片,包含阴性对照、阳性对照、实验组;
    • 构建好的质粒及酵母菌;
     
    6. 结果示例
     
     
     
    组织定位分析

    启动子控制基因表达(转录)的起始时间、组织位置、表达的程度。我司可将启动子构建入含有GUS基因的载体中,该启动子可特异性调控该基因的表达。通过将该融合后的质粒导入拟南芥中,获得转基因拟南芥,GUS染色可直接观察该基因在植物中的组织表达位置。
     
    1. 技术原理

     
     
    2. 应用

    • 验证基因在植物中表达的组织特异性
     
    3. 实验流程

    • 构建包含目的基因启动子的质粒;
    • 重组后带有启动子序列的目的质粒转化拟南芥;
    •  GUS染色;
    • 拍照,分析结果。
     
    4. 服务说明

    • 客户可以提供构建好的载体,但需提交明确的待验证蛋白/启动子信息,包含核苷酸序列信息、氨基酸序列信息等;
    • 对于只提供序列或者目的基因的客户,公司可以提供载体构建服务,费用另计;
    • 由于生物实验的不确定性,对于结果为阴性的项目,公司将正常收取全部费用。
     
    5. 反馈客户信息

    • 完整的实验报告,包括详细的实验步骤及结果;
    • 原始图片,包含阴性对照、阳性对照、实验组;
    • 构建好的质粒及农杆菌;
     
    6. 结果示例

     
    拟南芥GUS染色效果图
  • 1.样品类型

    • 构建好的表达载体质粒:>2 ug;
    • 菌液:200 ul;
    • 基因模板:>0.02 ug
     
    2.生物学重复

    • 无需重复,建议备样2-3份
     
    3.保存和运输

    • 样品请置于 1.5 ml 管或合适管中,管上注明样品名称、浓度以及制备时间,管口使用Parafilm 封口。建议在运输前将所有样品管固定于 50 ml 带盖离心管中,再将 50 ml 管放在封口袋中。干冰或冰袋运输,不能反复冻融。
     
    4.其他

    • 样品技术需求表务必随样品一起邮寄,由于表格信息不全造成的损失由客户。

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