服务简介
Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。其基本原理是:具有同源性的两条核酸单链在一定的条件下,可按碱基互补的原则特异性地杂交形成双链。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量和其在样品中的拷贝数。
我公司提供专业优质的Southern blot技术服务,已完成有木薯、甘薯、马铃薯、水稻、大豆、玉米、番茄、烟草、拟南芥等多物种检测,成功发表数十篇高水平论文。我公司探针使用DIG(地高辛)标记,具有低噪、高敏、无放射性污染等优点,实验过程中保留原始数据和实验材料,数据真实可信,具有可重复性。我们使用最先进的自动化学发光成像检测系统,确保捕获最佳信噪比的成像时间点,可以交付给客户品质最好的实验结果,客户可直接使用我公司提供的Southern blot实验数据向高水平的杂志投稿。
应用领域
植物转基因阳性验证;
植物基因拷贝数验证;
样本要求
1,探针
请提供2μg探针,或提供探针用基因模板DNA 10 μg,DNA信息以及引物序列后由公司合成探针,单独收费。
2、样品
请提供状态新鲜的绿叶:大田叶片10g,组培苗叶片5g,取样需要迅速,取材后立刻液氮速冻,干冰保存,过程中必须保持超低温状态。
3、正对照质粒
请低温寄送质粒DNA 10 μg。
4、点样顺序
请按13孔/膜备注好点样顺序。
5、保存和运输
样品请置于 1.5 ml 管或合适管中,管上注明样品名称、浓度以及制备时间,管口使用Parafilm 封口。建议在运输前将所有样品管固定于 50 ml 带盖离心管中,再将 50 ml 管放在封口袋中。干冰运输,不能反复冻融。
6、样品标记要求
双标记,寄样管、寄样袋均写清楚样品编号;样本命名不要使用简单的字母或数据,如A/B/C或者1/2/3,要求样品命名以字母加数字编号,如A1,避免重复。
7、其他
样品技术需求表务必随样品一起邮寄。 避免因无法及时核对信息导致项目周期延长。
技术路线
结果示例
参考文献
1)Dessaux Y, Elasri M, Glickmann E et al. 1995 The use of digoxigenin -labelled probes to detect DNA sequences specific for plant pathogenic bacteria. Cell Mol Biol , 41(7): 933-43.
2)Gebbie L 2014 Genomic Southern blot analysis. Methods Mol Biol, 1099: 159-77.
3)Gold B, Radu D, Balanko A et al. 2000 Diagnosis of Fragile X syndrome by Southern blot hybridization using a chemiluminescent probe: a laboratory protocol. Mol Diagn, 5(3): 169-78.