目前常用的去除高丰度蛋白的方法有三种:物理化学法:通过高速离心、色谱分离等方式去除高丰度蛋白;高丰度蛋白去除试剂盒:通过特异性结合去除高丰度蛋白,使样品复杂性显著降低,从而检测到更多低丰度蛋白。中低丰度蛋白富集试剂盒:这个方法的思路和第二种正好相反,通过特异性富集中低丰度蛋白,达到更好的检测中低丰度蛋白的目的。
去除高丰度蛋白的方法有哪些?
什么时候需要去除高丰度蛋白?不去除有什么影响?
一般来说体液样本如尿液,血液,乳汁等都会存在高丰度蛋白。高丰度蛋白在样本中占据了大部分的蛋白质总量,它们的存在会一定程度上干扰低丰度蛋白的检测信号,增加数据的复杂性,降低样本的分辨率从而影响检测效果。
蛋白组如何选择数据库?
UniProt>NCBI>其他 ,UniProt是目前世界上最大最完整的蛋白数据库。其中除了人和小鼠可以用Swiss-Prot更好以外,其他物种都推荐UniProt Proteomes。UniProt的信息大多数都是经过验证或人工校验的,冗余度非常低。
NCBI是由美国国立生物技术信息中心(NCBI)维护的一个包含各种物种蛋白质序列的大型数据库,蛋白库的信息是任何一个研究者都可随意提交的,因此NCBI中收录的蛋白质信息非常丰富。但是很多蛋白的信息是没有经过验证或人工校验就直接提交的,所以会有很多冗余的蛋白信息。
不同批次的蛋白组可以一起分析吗?
不可以。因为质谱的批次效应比较大,两个检测时间点仪器的响应会发生变化,这样可能导致的一些含量低的物质可能只在一个批次里被检出。并且由于仪器的波动会导致物质的峰面积整体发生变化,从而影响结果的一致性和准确性。
作为调控产物的蛋白质又是如何成为机制调控的起因的?
转录因子,是一类具有能够结合到DNA特定序列上影响基因的转录过程的蛋白质。它对于理解基因表达调控、信号传导途径、细胞分化和发育,以及疾病的发生和发展具有重要意义。一般情况下,可以利用JASPER、AnimalTFDB、PlantTFDB等数据库获取转录因子结合的motif信息,再利用MEME FIMO等软件预测转录靶向基因。